Evaluación del herbicida imazapir como agente de selección de naranjo dulce transgénico

Abstract

Debido a las complejas características reproductivas de los cítricos la mejora convencional es prácticamente inabordable. Mediante ingeniería genética estas especies son difíciles de transformar, de ahí la importancia de diseñar un procedimiento de transformación específico para estos frutos. En un protocolo de transformación genética es esencial incluir un método eficiente de selección de transformantes eficiente. En este sentido, el antibiótico aminoglucósido kanamicina es el agente de selección más ampliamente utilizado en protocolos de transformación genética, pero por el origen bacteriano del gen que confiere resistencia a este antibiótico, su uso no es bien aceptado por parte de los consumidores. En este proyecto se propone al herbicida imazapir como agente de selección que sustituya a la kanamicina por el origen vegetal del gen de resistencia al herbicida y se evalúa la naturaleza transgénica de plantas resistentes al herbicida. En experimentos de cultivo in vitro empleando distintas dosis del herbicida se evaluó la calidad de los callos formados y la capacidad de brotación de explantes de naranjo dulce a fin de optimizar la dosis de uso del herbicida. Por otro lado, se evaluó mediante PCR la inserción del ADN-T y la actividad de transgen GUS mediante ensayo histoquímico, en líneas de Citrange carrizo previamente disponibles potencialmente transgénicas y resistentes a imazapir. Los resultados obtenidos sobre el efecto del imazapir en los dos genotipos cítricos ensayados, indican que dicho herbicida puede ser usado como agente de selección en futuros experimentos de transformación genética de ambos genotipos

Due to the complex reproductive characteristics of citrus, conventional breeding is practically unapproachable. It is important to design a specific transformation procedure for these trees because through genetic engineering they are difficult to transform. In a genetic transformation protocol, it is essential to include a selection method to efficiently recover transformants. In this regard, the aminoglycoside antibiotic kanamycin is the most widely used selection agent in genetic transformation protocols, but due to the bacterial origin of the gene that confers resistance to this antibiotic, its use is not well accepted by consumers. In this project, the herbicide imazapir was proposed as a selection agent to substitute kanamycin due to the plant origin of the herbicide resistance gen. The transgenic nature of herbicide resistant plants was also evaluated. In vitro culture experiments were performed to evaluate the quality of the callus formed and the regeneration of shoots in sweet orange (Citrus sinensis) explants in order to optimize the use dose of the herbicide. In addition, the insertion of T-DNA and the activity of the GUS transgen were evaluated by PCR and histochemical assay, respectively, in previously available potentially transgenic imazapyr resistant Citrange carrizo lines. The results obtained on the effect of imazapir on the two citrus genotypes tested indicate that the aforementioned herbicide can be used as a selection agent in future genetic transformation experiments of both genotypes.