Isolation and characterization of extracellular vesicles in Candida albicans
Aislamiento y caracterización de las vesículas extracelulares en Candida albicans
Date
2020-03-24Discipline
Ciencias ExperimentalesAbstract
Background
: The occurrence of systemic infections due to
C. albicans
has increased especially
in critically ill patients. In fungal infections, secretory mechanisms are key events for disease
establishment. Recent findings demonstrate that fungal organisms release many molecular components to the extracellular space in extracellular vesicles.
Aims:
We develop a method to obtain exosomes from yeast cultures of the
Candida albicans
.
Methods
:
Yeast strains used in this work were
C. albicans
SC5314,
C. parapsilosis
(ATCC
22019) and
C. krusei
(ATCC 6258). Yeasts were grown at 37.º in liquid YPD medium. The cell
cultures were centrifuged and the supernatant filtered through sterile nitrocellulose. Filtrates
were concentrated and centrifuged using an ultracentrifuge. The sediment was analyzed by electron microscopy of transmission.
Results:
The transmission of electron microscopy and nanoparticle tracking analysis confirmed
the presence of extracellular vesicles (exosomes) of sizes between 100 and 200 nm and the absence of cellular contaminants. This was ratified by the characterization of proteins performed
through the western blot technique, where the absence of cell contamination in the preparations
was assessed.
Conclusions:
The method proves to be highly effective due to the homogeneity and purity of the
obtained microvesicles. The protocol developed in this paper proves to be effective for obtaining exosomes of other
Candida
species, which will allow future studies to determine its protein
composition and the role that these vesicles can play. Contexto:
La aparición de infecciones sistémicas por
C. albicans
ha aumentado sobre todo en
pacientes graves. En las infecciones fúngicas, los mecanismos de secreción son eventos clave
para que el establecimiento de la enfermedad. Hallazgos recientes demuestran que los organismos fúngicos liberan muchos componentes moleculares al espacio extracelular en vesículas
extracelulares.
Objetivos:
Desarrollamos un método para obtener exosomas de cultivos de levadura de
Candida
albicans
.
Métodos:
Las cepas de levadura que se usaron en este trabajo son
C. albicans
SC5314,
C. parapsilosis
(ATCC 22019) y
C. krusei
(ATCC 6258). Las levaduras se cultivaron a 37.º C en un medio
YPD líquido. Los cultivos de células fueron centrifugados y el sobrenadante, filtrado por medio
de nitrocelulosa estéril. Los filtrados se concentraron y centrifugaron usando una ultracentrifugadora. El sedimento fue analizado por un microscopio electrónico de transmisión.
Resultados:
La microscopía electrónica de transmisión y el análisis de nanopartículas confirman
la presencia de vesículas extracelulares (exosomas) de un tamaño entre 100 y 200 nm, así como
la ausencia de contaminantes celulares. Esto se ratificó mediante la caracterización de proteínas
obtenidas por medio de la técnica de Western blot, donde se evaluó la ausencia de contaminación
celular en las preparaciones.
Conclusiones:
El método es altamente eficaz dada la homogeneidad y la pureza de las microvesículas obtenidas. El protocolo desarrollado en este artículo demuestra ser efectivo para obtener
exosomas de otras especies
Candida
, lo que permitirá que en futuros estudios se determine su
composición proteica y el papel que estas vesículas pueden desempeñar.